大鼠自体异体表皮细胞悬液混合移植 的实验研究

08 9月 2022
Author :  
大鼠自体异体表皮细胞悬液混合移植 的实验研究

吕国忠 朱宇刚 周红梅 顾在秋 杨敏杰

[摘要]
目的探讨自.异体表皮细胞悬液混合移植技术在创而修复中的应用、

方法 30只，大鼠随机配成15对后.分成细胞悬液移植组(A组,10对)和细胞膜片移植组(B组,5对)。取每只大鼠的去全厚皮创面分离表皮细胞，并根据配对情况按1:1的细胞比例混合,体外常规培养。4 d后收获A组混合细胞悬液,14 d后收获B组混介细胞膜片、将此细胞悬液和膜片分别转移至A、B组相应供体大鼠的去全厚皮创面、随后A组每对大鼠的创面交叉覆益配对方的体全厚皮;B组创血覆盖胶原膜及“优妥”敷料。比较移梢后2~3周两组的创面修复情况。

结果 术后2~3 尚,A组创面大多愈介,表面光滑.与皮下连接紧密。术后第5天,B组创面部分细胞膜片脱落,部分成活。膜片成活的
创面后期再次出现小创面经久不愈，

结论 自异体表皮细胞悬液混合移植足一种可行的、体内构建皮肤、修复创面的方法。

[关键词] 表皮;细胞培养; 皮肤移植;烧伤

An experimental study on the in vivo intermingled culture of rat autologous and allogeneic epithelial cells LV Cuozhong, ZHU Yugang, ZHOU Hongmei. Department of Burns, The Third People' s Hospital, Wuxi 214041,Jiangsu Province, P. R. China

[ Abstract] Objective To explore a method for in vivo skin reconstruction. Methods Thirty Spraque-Dawley ( SD) rats were randomly divided into two paired groups, i. e. in vivo culture ( A group，10
pairs) and in vitro grafting (B group,5 pairs). Skin samples were harvested from the rats of the two groups for the isolation of epithelial cells which were then mixed cultured in vitro in 1: I ratio. Mixed cellular sus- pension in A group was harvested 4 days after culture. The mixed cellular sheets were harvested 14 days after culture. The cultured cells and sheets were then thansplanted onto ttal skin loss wounds of donor rats for further cultivation. The wounds in A group were covered with allogeneic full-thickness skin. While the wounds in group were covered by collagen membrane and gauze. Wound repair was observed and compared between the two groups al 2-3 post - operative weeks.

Results
Most of the wounds in A group healed after 2-3 weeks with smooth surface, and the peithelium connected closely and tightly with the: subcutaneous tissue. In the wounds in B group on 5 post-operative day . some of the cellular sheets survived and some fell off. Even the healed wounds in B group would be injured again resulting in protracted small wounds.

Conclusion In vivo in situ epithelia! culture might be an optional method of skin reconstruction for wound healing.

[Key words] Epithelium; Cell culture; Skin graft; Burm

      表皮细胞培养与移植技术可为人面积深度烧伤的治疗提供充足的皮源，但尚存在体外培养周期长、表皮细胞膜片呵创面基底粘着差等不足”。本研究采用自、异体表皮细胞恳液混合移植技术，对实验大鼠的创面进行修复，为该技术的临床应用提供了实验依据。

材料与方法

1．实验动物与分绀：健康SD大鼠30只，雌雄不限，体晕250—300 g。所有大鼠按随机表两两随机配对，共15肘．并随机分为细胞悬液移植组(A组．10别)、细胞膜片移植组(B组，5对)。

2，表皮细胞的分离：两组动物经戊巴比妥钠腹腔麻醉后，背部去毛，七U取全层皮肤1 cm x 3cm。经反复清洗、消毒，剪成0 3 mt·×0 3 cIn大小，用质量浓度0．2％的dispase 4℃消化J6 h，分离表皮与真皮。将表皮置于质量浓度0．25％胰蛋白酶中，37％消化10～20 min，收获丧皮细胞，橱整细胞浓度至2 x10“／ml待用。

3．自、异体表皮细胞混台体外培养：将各大鼠的表皮细胞悬液按照配对情况，以1：1的细胞比例混合(共1 5份)后．加入DMEM培养液(美国Sigma公司)，于37℃、体积分数5％CO：培养箱中培养，每1—2天换液。(I)A组各份混合丧皮细胞融合后(约接种4d后)，加入质量浓度0．25％胰蛋白酶消化30 min调整细胞密度为7×10’／ml备用。（2)接种后14 d左右．B组各份混合表皮细胞融台成膜片，镜下观察有4～5层细胞。收获完整的细胞膜片，转移至”优妥”(Urgotul)敷料(法国URGO公司)备用。

4. 鼠尾胶原的制备：参照文献[2]进行。

5. 性台表皮细胞悬液移植术：取皮后的A组大鼠再次麻醉去毛．切除 8cm × 8cm大小的背部及侧胸部全层皮快．与创面内缘皮下埋入直径8 cm的钢丝圈．防止伤口收缩。取鼠尾胶原及A组每份混合表皮细胞悬液各1ml，混匀后涂布于相应供体动物创面上，再交叉覆以配对方的异体全厚皮，打包包扎固定，术后第7天打开包扎，观察皮片成活情况。

6.混合表皮细胞膜片移植术:取皮后的B组大鼠再次麻醉去毛，于背部制作8 cmx8 cm大小的全层皮肤缺损创面。经严密止血,抗生素等渗盐水湿敷后,将各份混合表皮细胞膜片回植于相应供体大鼠的创面上.外覆胶原膜“优妥“敷料.打包加压包扎。术后第5天打开包扎,观察膜片成活情况。

7.病理形态学观察:待A、B组创面愈合后,进行组织切片及形态学观察。

结果
1.混合表皮细胞悬液移植结果:术后第7天,创面异体皮已成活、转红润(图1) 。术后第3周异体皮开始脱落,其下可见成片的上皮,创面大部分已愈合且无收缩(图2) 。
2.混合表皮细胞膜片移植结果:术后第5天,部分细胞膜片粘着成活、部分脱落:膜片成活的创面自术后第14天起,再次出现小创面,且逐渐增大成片,经久不愈。

3.病埋形态学观察:A组愈合的创面上皮层有3~4层鳞状上皮细胞,其下可见多层纤维组织，含有大量的成纤维细胞。有部分上皮细胞伸人至其下的纤维中(图3) 。B组创面于术后第2周可见肉芽组织形成(图4) 。

讨论

      创面修复足烧伤治疗的重要组成部分。继各种皮片、皮瓣、自体微粒皮片移植修复后,近几年又兴起了表皮细胞培养及体外构建复合皮肤的组织工程技术,并已成为临床医学及医学生物工程领域的研究热点。1975 年Rheinwald等[2|成功建立表皮细胞体外培养方法以来,除白体皮片外,自体表皮细胞体外培养增殖习是自体皮的惟一皮源。国外已有将体外培养的白体表皮细胞膜片用于创面修复的报道, 但该技 术尚存在培养周期长(≥3 ~4周).移楨成活率低等问题。月前国内外尚术寻找到理想的表皮细胞膜片支撑物,尽管有过多种尝试，包括各种合成理化材料及处理后的生物材料【6】.
      表皮细胞悬液移植与表皮细胞膜片移植比较,具有以下优点:(1)可缩短细胞体外培养周期、省却移植步骤、加速创面愈合;(2)在体环境更适宜表皮细胞生长,增殖,创面基底的渗出液可为细胞生长提供营养。病理切片结果显示，移植的细胞悬液长成膜片后,出现许多皮钉样结构,伸人创面深层,与培养过程中形成的基底膜一起近似构建了真皮乳头，提示长皮细胞悬液可根据基底创面的情况进行生长修复。这就使生长出的细胞膜片与创面基底结合较紧密,创面愈合后表皮不易松动、破损。

      本研究采用自、异体表皮细胞悬液进行混合移植，不仅可节省自体皮源，亦可明显缩短培养周期；异体细胞可分泌细胞外基质成分、自分泌转化生长因子和表皮细胞诱导的淋巴细胞活化因子，并充当自体表皮细胞增生的暂时性模板，通过细胞与细胞间接触，释放各种生物活性因子，对表皮重建及刨面愈合起r生物促进作用【7、8】，但临床应用问题尚待进一步探讨。

参考文献
1 Carsion H, Ainaud P , Berer HL.et al. Culured epithelid aulograft in exterlsive burn converage of severely traumatized patients: a five  year single-center experinnce with 30 paticnts. Burns ,2000 ,26:379 - 387.

2 Rheinwald JC. wainwright DJ.Jordon RE.et al, Seriel cultivation of human epidermal kpratinonytes. Cell, 1975 ,6:331 - 335.

3 鄂征.主编.组织培养和分子细胞学技术.北京:北京出版社，1997.56 - 57.

4 Faure M, Mauduit C. Schmitt D.et al. Growth and ditterenliation of human epidermal cultures used as auto. and allografte in humans. Br J Dernatol , 1987,116:161 - 170.

5 Parentcau N. Skin: the first tissue-engineered produels. Se1 Am，1999 ,280:83 - 84.

6李辛群,磨镇江，史济湘烧伤后皮肤混合移植中局部免疫抑制的研究.中华创伤杂志,1991,51:937 - 264.

7 Thivolet J, Faure M , Demidrm A ,el al. Long -term survival and immunological lolerance of human epidermal allografts produced in culture.Transplantation, 1986 ,42:247 - 280.

8 Phillps TJI. Cultured epidermal allogralls-a pernanent or temporary solution ? Transplantation.1991 .51 :937 - 941.

本文献包括图片转载于中国烧伤杂志2003年2月第19卷第一期，不代表本文献赞同其观点和对其真实性负责，我们用于阅读分享，非商业用途，如若侵权，请告知删除。

 

 

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