山楂树皮膏的抑菌作用及对小白鼠 深Ⅱ度烫伤的治疗效果

17 1月 2022
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摘要:目的:研究山楂树皮膏的抑菌作用及对小白鼠深Ⅱ度烫伤的治疗效果。方法:通过水提法获得山楂树皮膏,用滤氏片法来观察膏的抑菌效应;对小白鼠背部进行深Ⅱ度烫伤,用对照实验的方法来观察山楂树皮膏促进烫伤伤口愈合的效果。结果:山楂树皮膏对大肠杆菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的生长均有抑制作用,对白色念珠菌抑制效果最为明显;山楂树皮膏可以减少小白鼠背部深Ⅱ度烫伤伤口的感染机率,缩短创面的愈合时间。结论:山楂树皮膏具有广谱的抗菌作用,对动物烫伤有较明显抗感染、促进伤口愈合的作用。

关键词:山楂树皮膏;抑菌作用;深域度烫伤;伤口愈合

      烫伤是由于热、化学物质、光、电以及放射线等引起的组织损害,主要指皮肤和(或)黏膜,严重者可伤及皮下组织,如肌肉、骨、关节甚至内脏,是一种极其复杂的外伤性疾病。存在着创面疼痛、进行性坏死、易感染、瘢痕愈合等四大难题[1]。中国中西医结合学会烧伤专业委员会进行的全国大样本统计数字显示,人群中烧烫伤的发病率在 2%左右[2]。根据烧(烫)伤程度,分芋度。玉度伤:烫伤只损伤皮肤表层,局部轻度红肿、无水泡、疼痛明显;域度伤:烫伤是真皮损伤,局部红肿疼痛,有大小不等的水泡;芋度伤:烫伤是皮下脂肪、肌肉、骨骼甚至内脏都有损伤。

     烫伤可造成体内水分、蛋白质、电解质和热量流失,微生物则可通过受损部位入侵体内,引起人体局部或全身的感染,感染后伤口的恢复延缓,严重感染则威胁伤者生命安全[3]。在烫伤的治疗上,西医理论侧重于愈合创面、抗菌消炎、止痛等方面,临床上常用抗生素、氟哌酸银或磺胺嘧啶银来抗感染;用鱼肝油、维生素 AD、玻璃酸或人表皮重组生长因子来加强生肌;丁卡因、达克罗宁、苯甲醇用于止痛等[4]。中医治疗烫伤以“行气活血,推陈致新,燥湿收脓,脓去生肌,酸涩收口,生肌收口”为主要的治疗原则[5],对烧烫伤的治愈率达95%以上,居世界领先水平[1]。中医治疗烧烫伤历史悠久,使用的方剂也很多,而当归、大黄、黄连、黄柏、黄芩、紫草、冰片、白芨等是使用频率较高的几味中药材。到了现代,烫伤的治疗常利用的是中西医结合的方法,效果也非常显著,总有效率甚至达 100%[6]。

     我国地域广阔,民族众多,对于烫伤的治疗,除临床上使用的各种方法外,民间还有很多种烫伤的偏方,方法灵活多样,讲究就地取材,效果良好。在云南省丽江市的一些偏远山区就有利用山楂树皮加水熬煮制成的膏状物来治疗烫伤的方法。山楂为蔷薇科山楂属植物,在我国广泛栽培,在云南省各地及邻近省区也较多。山楂的果实在两千多年前就开始入药,目前也是国家卫生部批准的“药食两用”中药,是健脾开胃、消食化滞、活血化痰的良药。国家近年来加大了对山楂(包括山楂浆果、山楂叶、山楂花、山楂树皮)资源的研究和开发,发现山楂在临床防治糖尿病及其并发症方面具有降血糖、调血脂、抗氧化应激、改善胰岛素抵抗、抗炎以及改善糖尿病并发的血管病变等作用[7]。但从所查阅的资料看,没有发现有关山楂树皮在抗菌消炎方面的报道。对于药用植物资源的开发,树皮的研究是不可忽视的,如经济价值极高的紫杉醇就主要蕴含在红豆杉的树皮中。我国作为一个多民族国家,各族人民在漫长而严酷的生存斗争中,积累了丰富的防病治病的经验和用药方法,它同传统中医一样,是中国传统文化的重要组成部分,有理由需要不断去挖掘与保护。

     本实验从民间偏方入手,将山楂树皮加水熬制后获得山楂树皮膏,以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌为测试菌种,探究山楂树皮膏的抑菌作用;对小白鼠背部造成深域度烫伤,通过对照实验的方法来看山楂树皮膏对烫伤的治疗效果。希望通过本实验能对民药的收集与保护,山楂的全面开发利用提供实验依据。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1材料来源。山楂树皮取自丽江永胜县;实验用小白鼠由普洱学院生化实验室提供

1.1.2 主要试剂。硫化钠(AR,天津市博迪化工有限公司);乙醚(AR,国药集团化学试剂有限公司)

1.1.3 菌种。大肠埃希菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌

1.2方法

1.2.1 培养基。牛肉膏蛋白胨培养基及酵母培养基,制成平板备用。

1.2.2抑菌实验

(1)将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌进行斜面活化,分别取一环各自溶于 50mL 无菌水中混匀;将直径约为 10mm 的无菌滤纸片放入膏中浸泡约 30min,取出放在无菌培养皿中备用。

(2)取牛肉膏蛋白胨培养基制得的平板 9 皿,其中 3 皿涂布上大肠杆菌,3 皿涂布上金黄色葡萄球菌,3 皿涂布上枯草芽孢杆菌;另取 3 皿酵母培养基制得的平板涂布上白色念珠菌。每皿涂布的量为0.2mL。

(3)用无菌镊子小心取出滤纸片,将其贴在培养皿四个角。大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌 37益培养 24h,白色念珠菌 28益培养 48h 后观察抑菌圈的大小。

1.3小白鼠烫伤及消炎实验[8]

1.3.1 山楂树皮熬制膏。取山楂树的树皮(包括韧皮部)500g 在 5 000mL 的水中持续加热,待水基本煮干,溶液熬制成膏状,停止加热。收集浓稠膏状物,备用。

1.3.2 小白鼠脱毛。让小白鼠(共 13 只)在实验室适应环境 5 天。取 10%硫化钠对称涂抹在小鼠背部4cm伊4cm 范围内,待 24h 后小鼠局部的毛被脱去,用清水清洗局部,让皮肤暴露备用。

1.3.3 烫伤。让小白鼠吸入乙醚导致其昏迷,昏迷期间把从沸水中取出的直径为 2㎝的一角的硬币迅速贴在已脱毛背部的皮肤上,停留 5s,使小白鼠皮肤达到深域度烫伤。

1.3.4 消炎治疗。烫伤小白鼠背部左侧为实验组,右侧为对照组。在小白鼠烫伤 1h 后,给实验组一侧涂抹山楂树皮膏,对空白对照组不做任何处理。对实验组连续 3d、每天 1 次涂抹药膏。3d 后不再涂抹药膏,对创面不做任何处理。让小白鼠自由摄取水和食物。

1.4创面面积质量的及愈合率的测定[8]

      采用描记称重法测定创伤面积:用透明的纸对小白鼠的创伤面进行完整描绘,并剪下所描绘创伤面的图形,用电子天平称其质量,所得质量为创面面积质量;以烫伤后第 4d 所描绘的创面面积为烫伤起始创面面积,以 14d 后描绘的创面面积为烫伤最终创面面积,用质量代替面积进行创伤面积愈合率的计算。

      组织创伤面积愈合率(%)=(烫伤起始面积-烫伤最终创面)/烫伤起始面积×100%

2.结果与讨论

2.1山楂树皮膏的抑菌实验结果

熬制好的山楂树皮膏为棕红色浓稠液体(如图1),气味带有淡淡的山楂树本身的气味,使用时稍会有粘黏感。

用滤纸片法测定山楂树皮膏对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌及白色念珠菌的抑菌效果,结果如表 1:

      从图 2 与表 1 所示实验结果来看,山楂树皮膏对 4 种测试菌株均有一定的抑制作用,其中对白色念珠菌的抑制作用最明显,其次为大肠杆菌及金黄色葡萄球菌,对枯草芽孢杆菌的抑制作用最弱。4 种测试菌株中,除大肠杆菌为 G-外,其余 3 株均为G+,山楂树皮膏均对它们表现出抑制效应,说明抑菌作用是具有广谱性的。

2.2山楂树皮膏对小白鼠伤口愈合的影响

      将从沸水中取出的 1 角硬币贴在已经去毛、皮肤裸露的小白鼠背上 5 秒,创面呈现血红,有小出血点,创面潮湿,有水泡产生,符合深域度烫伤的组织学划分标准[9],认定为深域度烫伤。

      通过观察,涂抹过膏药的实验组在第 2d 其红肿现象比空白对照组轻;到第 3d,实验组分泌物比对照组少;到第 7d,空白对照组有 3 只小白鼠的创面出现发炎症状,表现为伤口有组织液渗出,红肿未明显消退,创面处温度升高,但实验组创面干燥,没有组织液渗出,也没有发炎。在涂抹山楂树皮膏后第 15d,小鼠实验组创面全部愈合,生肌生发效果也明显优于对照组,见图 4。

      第 4d 开始进行烫伤面积测定,第 14 天进行愈合面积的测定。结果如表 2。

      对实验组和对照组的愈合率进行比较,除编号3 的小白鼠对照组的愈合率高于实验组外,其余 12组的小白鼠伤口的愈合速率均是实验组明显已于对照组。将愈合率按 90%以上,80%-90%,70%-80%,60%-70%及 60%以下几个阶段来进行统计,用药 10d 后,实验组创面愈合率均在 60%以上,其中 90%以上 4 只,80%—90%3 只,70%—80%的 1只,60%—70%的 5 只;对照组中,愈合率在 90%以上的 1 只,80%—90%的 3 只,70%—80%的 3 只,60%—70%的 3 只,60%以下有 4 只。统计结果比较见图 3。

      通过山楂树皮膏的抑菌实验及促进小白鼠烫伤伤口的愈合实验充分说明,山楂树皮中确实含有抑菌、促进组织再生的成分。将山楂树皮膏涂抹在小白鼠的烫伤面后,在创面形成一层药膜,一方面可防止皮肤水分的蒸发和组织液的渗出,有保护创面的作用;另一方面通过复杂的修复机制,来促进创面的肌肤再生及毛发再生。

2.3讨论

     山楂树皮膏对大肠杆菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌均有一定的抑菌效果。从2010 年的资料看,我国 114 所三级甲等医院临床患者伤口感染的细菌分离率最高的前 5 位病原菌依次为:大肠杆菌占 20.7%、金黄色葡萄球菌占16.3%、铜绿假单胞菌占 9.6%、肺炎克雷伯菌占7.6%、表皮葡萄球菌占 5.1%[10]。本次实验由于条件的限制,仅对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌进行了测试,而没有做山楂树皮膏对铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、表皮葡萄球菌的抑菌效应。

      对山楂资源的化学成分分析结果表明,山楂树资源(包括山楂浆果、山楂叶、山楂花及山楂树皮)富含黄酮类、三萜类、有机酸类、甾醇类及糖类等生物活性物质。其中黄酮及衍生物类化合物多达 60余种,包括黄酮、黄酮醇、黄烷酮类及黄烷醇聚合物,被认为是山楂生物活性的主要成分[7]。

      山楂树皮膏相比于另一种民间偏方荔枝草有更好的疗效[11]。伤口愈合是个复杂的生理生化反应,往往一种植物药难达到理想的效果,需要几种药配合使用。

3.结论

      山楂树皮膏对多种细菌有较明显的抑菌效果,对烫伤伤口的愈合有促进作用,有进一步开发及利用价值。

参考文献

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[9] 彭旦明, 刘雯. 烧(烫)伤动物模型的建立及评价[J]. 辽宁中医杂志, 2011(9): 1712耀1713.

[10] 胡志东, 王凤霞, 李金,等. 2010 年度卫生部全国细菌耐药监测网报告:伤口感染病原菌分布及耐药监测[J].中华医院感染学杂志, 2012, 22(1): 23耀27.

[11] 罗春阳,阳秀芝,范彩霞,等.荔枝草鲜汁治疗烫伤的实验研究[J].湘南学院学报(医学版),2008,10(2): 22-23.

本文献由伤口世界转自普洱学院学报。

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